它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 服務流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 梅恩君病毒RT-LAMP試劑盒 | RT-LAMP kit for Menjun virus | BJ-P988192 |
? 使用及效果: PCR反應特點 (1) 特異性強 PCR反應的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結(jié)合是關鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標本的純度要求低 不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 1g嗜酸乳桿菌Anti-ACOT12 Antibody 5g短波單胞菌Anti-ACOT4 Antibody 1g山梨木糖假絲酵母Anti-ACOT13 Antibody 25g刺器腐霉Anti-ACOT2 Antibody 5g毒害艾美耳球蟲Anti-ACOT8 Antibody 1g黑木耳Anti-ACRBP Antibody 5g蘋果黑腐皮殼菌Anti-ACSL6 Antibody 250ml燼灰刺孢鏈霉菌Anti-ACSL6 Antibody 100g桔青霉Anti-ACSS1 Antibody 500g釀酒酵母Anti-ACTBL2 Antibody 1mg榛色青霉Anti-ACTBL2 Antibody 250g絲蘭輪紋斑菌Anti-ACTG2 Antibody 5g塊鱗灰毒傘Anti-ACTC1 Antibody 500ml金黃色葡萄球菌Anti-ACVR1C Antibody 100g*灰葡萄孢Anti-ACTIN Antibody 500g產(chǎn)單核細胞李氏桿菌Anti-ACVRL1 Antibody 250g產(chǎn)氣莢膜梭菌 毒素E型Anti-ADAM10 Antibody 梅恩君病毒RT-LAMP試劑盒LRP/MVP /FITC 熒光素標記肺耐藥相關蛋白抗體IgG7型膠原抗體5-溴-2,4-二氯嘧啶Porcine ADCY3 (Adenylate Cyclase 3) ELISA Kit LRP1/CD91/FITC 熒光素標記低密度脂蛋白相關受體1抗體IgG磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體5-溴-2,4-二氯嘧啶Porcine PGD2S (Prostaglandin D2 Synthase, Brain) ELISA Kit Phospho-LRP6 (Ser1490) /FITC 熒光素標記磷酸化低密度脂蛋白受體相關蛋白6抗體IgG原癌蛋白CBL2抗體4-乙?;郊姿峒柞orcine MMP-9 (Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit LRP6/FITC 熒光素標記低密度脂蛋白受體相關蛋白6抗體IgG信號調(diào)節(jié)蛋白α抗體4-乙?;郊姿峒柞orcine CAM-Ab (Anti-Calmodulin Specific Antibody) ELISA Kit LRRC4/FITC 熒光素標記腦瘤相關基因抗體IgG信號淋巴細胞活化分子CD150抗體N-芐基哌啶酮Porcine MN (Metanephrine) ELISA Kit LRRK2 /FITC 熒光素標記富亮氨酸重復激酶2抗體IgG巨噬細胞炎性蛋白16抗體N-芐基哌啶酮Porcine FTL (Ferritin, Light Polypeptide) ELISA Kit LTB4/Leukotriene B4/FITC 熒光素標記白三烯B4抗體IgG果蠅CG6856-PA抗體N-芐基哌啶酮Porcine H-Cadherin (Cadherin, Heart) ELISA Kit LTB4-R1/LTB4R/FITC 熒光素標記白三烯B4受體1抗體IgG細胞色素c氧化酶COX7A2抗體苯基順酐Porcine OLAb (Anti-Oxidized Low Density Lipoprotein Antibody) ELISA Kit 操作步驟: 1:樣品準備:取1毫升細胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應的準備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 |