服務(wù)流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 傘枝梨頭霉LAMP試劑盒圖片 | Lamp kit for pear head mold | BJ-P987412 |
它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應(yīng)。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
使用及效果: PCR反應(yīng)特點 (1) 特異性強 PCR反應(yīng)的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標(biāo)本的純度要求低 不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 1g立枯絲核菌Human Fcγ(Fc Fragment of IgG) ELISA Kit 25g盤長孢狀刺盤孢Human miRNA-210 ELISA Kit 5g紅鬼筆Human anti-SARS-CoV2(N) IgG ELISA Kit 25g伯克霍爾德菌Human ALOX5(Arachidonate Lipoxygenase 5) ELISA Kit 5g環(huán)圈鏈霉菌Human Hsd17b13( 17-beta-hydroxysteroid dehydrogenase 13) ELISA Kit 1g毒青霉Human SEPTIN7(septin-7) ELISA Kit 5g阿舒假囊酵母Human anti-SARS-CoV2(N) IgM ELISA Kit 1g曲霉屬Human anti-2019 nCoV(S) IgM ELISA Kit 5g解脂假絲酵母Human anti-2019 nCoV(S) IgG ELISA Kit 25MG白布勒擔(dān)孢酵母Human OTUD5(OTU domain containing 5) ELISA Kit 25g白靈側(cè)耳Human MARK2 ELISA Kit 5g靈芝屬Human MARK3 ELISA Kit 1g黑木耳Human MARK1 ELISA Kit 250mg美澳型核果褐腐病菌Human MARK4 ELISA Kit 100g玉米大斑病菌Human MARS ELISA Kit 25g棕褐小單孢菌Human MARVELD2 ELISA Kit 10mg猴頭Human C1orf31(Cytochrome c oxidase assembly factor 6 homolog) ELISA Kit 傘枝梨頭霉LAMP試劑盒圖片Kovacs氏靛基質(zhì)試劑人腦微血管內(nèi)皮細胞 原代上皮細胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基BSA (bovine serum albumin) 牛血清白蛋白(第五組分) V-P甲、乙液試劑人腦血管平滑肌細胞 原代內(nèi)皮細胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基KLH (keyhole limpet hemocyanin) 血藍蛋白 1%亞碲酸溶液人腦血管外膜成纖維細胞 原代平滑肌細胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基OVA (ovalbumin) 雞卵白蛋白 亮綠瓊脂人腦血管周細胞 原代成纖維細胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基THY (thyroglobulin,TG) 甲狀腺球蛋白 平板計數(shù)瓊脂(PCA)人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細胞 原代心肌細胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基HSA/human Serum albumin 人血清白蛋白 平板計數(shù)瓊脂(PCA)人脈絡(luò)叢上皮細胞 原代表皮角化細胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Hu Fibrinogen 人纖維蛋白原 假單胞分離瓊脂人脈絡(luò)叢成纖維細胞 原代系膜細胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Streptavidin, SA 鏈霉親和素 假單胞分離肉湯人腦膜細胞 原代肝實質(zhì)細胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Protein G/FITC FITC標(biāo)記蛋白-G 操作步驟: 1:樣品準(zhǔn)備:取1毫升細胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復(fù)用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應(yīng)的準(zhǔn)備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應(yīng)管可以有多個。配制過程中應(yīng)注意無菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 |