DIY夾心法ELISA試劑盒常見(jiàn)技術(shù)指南：
1、選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì)；若選擇兩個(gè)單抗，必須識(shí)別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對(duì)。
2、ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號(hào)和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測(cè)抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說(shuō)明書(shū)常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。
3、標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說(shuō)明書(shū)中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
4、一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過(guò)將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml?？衫脴?biāo)準(zhǔn)的ELISA試劑盒操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
5、為了優(yōu)化靈敏度，建議過(guò)夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。
6、若使用過(guò)氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物酶的活性。
7、當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig.Galectin 1    半乳糖凝集素1抗體
ICOS/CD278    誘導(dǎo)協(xié)同刺激分子CD278抗體
IL-31    白細(xì)胞介素31抗體
IL-28A/IFNL2    白細(xì)胞介素28A抗體
IL-32/NK4    白介素32抗體
IL-33/NFHEV    白介素33抗體
ILT2/CD85j    細(xì)胞表面免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄因子2抗體
Integrin alpha 2/CD49b    整合素α2抗體
Integrin alpha 2b/CD41    血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗體
IL-17RC/IL-17RL    白介素17受體C抗體
IGSF8    免疫球蛋超家族成員8抗體
IL-33    白介素33抗體
Importin 9    核蛋白9抗體（Ran結(jié)合蛋白M）
eIF3A    真核翻譯起始因子3A抗體
phospho-eIF4G (ser1185)    磷酸化真核翻譯起始因子4G抗體
Integrin alpha 4+Beta 7    整合素α4β7抗體
phospho-IRF3 (Ser386)    磷酸化干擾素調(diào)節(jié)因子3抗體
ISLR2    ISLR2蛋白抗體