大鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（CNTF）ELISA試劑盒操作步驟

  1.實(shí)驗(yàn)之前準(zhǔn)備好所有的標(biāo)準(zhǔn)品（見(jiàn)備用試劑）。建議所有的標(biāo)準(zhǔn)和樣本都做復(fù)孔。

2.首先把微孔板固定在支架上，分別設(shè)好相應(yīng)的孔（空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔），然后在包被板上，標(biāo)準(zhǔn)品和代測(cè)樣本孔準(zhǔn)確加樣50μl

3.加10 μL的生物素到代測(cè)樣本孔中。（標(biāo)準(zhǔn)孔不加）
4.每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，混合，混合在這一步是很重要的。封板后置37℃溫育1個(gè)小時(shí)。
5.在溫育結(jié)束前15分鐘內(nèi)準(zhǔn)備顯色液。（見(jiàn)備用試劑）
6.用下面的一種方法洗板;
7.手洗：將微孔板中的混合物倒入合適的廢物器皿中，然后每孔注滿稀釋好的洗滌液，再到掉，如此重復(fù)4次，然后倒置微孔板，將其拍到吸水紙上或者紙巾上，直到拍干。、
（注：洗板的時(shí)候要緊握微孔板的兩側(cè)，以確保所有的板條不脫落）
8.機(jī)洗：吸干所有的孔，然后用洗板機(jī)洗板5次，調(diào)整洗板機(jī)盡可能洗掉所有的液體，設(shè)置填充量在350微升/孔/清洗（范圍：350-400微升），洗板后，倒置微孔板，將其拍到吸水紙上或者紙巾上，直到拍干。建議洗板機(jī)設(shè)置的浸泡時(shí)間為10秒，震動(dòng)時(shí)間為5秒。
9.每孔依次加入顯色劑A 50μl，顯色劑B 50μl，封板后置20-25°C顯色15分鐘.
10.每孔加終止液50μl混合
11.在30分鐘以內(nèi)讀酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)的O.D值