凍存細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟：

(1) 將一管細(xì)胞從液氮罐中取出，注意保護(hù)手和眼睛。

(2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體*融化。

(3) 將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。

(4) 用70％的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。

(5) 打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋（注意，由于凍存管有負(fù)壓，開蓋時可能會有少量溢出，這是正?，F(xiàn)象）。

(6) 用多聚賴氨酸（或參照說明書）包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細(xì)胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細(xì)胞。

(7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開蓋子。

(8) 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中（37℃，5%CO2，95%空氣）

(9) 放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。