細胞活化,收到細胞株包裹時,請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養(yǎng), 或立即冷凍保存(置于–70 °C,隔夜后,移到liq N2)。下面了解冷凍細胞解凍程序:
1. 依據細胞株數據單zhi 定之基礎培養(yǎng)基種類、血清種類和其它zhi 定之成份和比例,制備培養(yǎng)基。絕大多數之細胞均無法立即適應不同之基礎培養(yǎng)基或不同之血清種類,若因實驗需要,必須有所不同時, 務必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細胞適應后,方進行所需之實驗。
2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清),對細胞而言差異極大,請務必依據細胞株資料單zhi 定之血清種類培養(yǎng)之。
3. 將培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫, 回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之, 移入無菌操作臺內。 取出冷凍管, 立即放入37 °C 水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿,否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化后,以70%ethanol擦拭冷凍管外部,移入無菌操作臺。
4. 依據細胞種類和濃度,于無菌操作臺內取10 ml 培養(yǎng)基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液, 緩緩加入T25 或T75 flask 內之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37 °C,5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
5. 對絕大多數細胞而言,1 % 以下之冷凍保護劑DMSO,不會對細胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍 細胞中去除,待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對極少數因對DMSO 敏感或會造成細胞分化之細胞,需立即去除DMSO 者,則可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中,離心300 xg (約1000 rpm),5 分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細胞均勻混合后,轉移至培養(yǎng)瓶中,再放入37 °C, 5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。