ELISA法檢測肺炎衣原體
 
    肺炎衣原體感染廣泛存在于*，以隱性感染為主。其臨床表現多樣，主要引起人非典型肺炎，還可引起咽炎、支氣管炎、虹膜炎、肝炎、心內膜炎及結節(jié)性紅斑等，亦是艾滋病、白血病等疾病繼發(fā)感染的重要病原，且與冠心病的發(fā)生相關，嚴重威脅人類健康。常見檢查方法為ELISA法檢測肺炎衣原體抗體。
    [檢測方法]  ELISA法
    [方法學原理]  采用ELISA法，血清加到包被純化的肺炎衣原體抗原的微滴孔中，使之發(fā)生反應，然后去除未結合的抗體，加入結合有HRP的抗人Ig抗體使之與已結合的抗體反應，結合的HRP與發(fā)色底物發(fā)生顏色反應。zui后，終止底物反應，在酶標儀上讀出光密度值。
    [標本準備]  取新鮮末梢血或靜脈血。如采血后24h內不能進行試驗，分離血清后將其保存于一20℃環(huán)境中。檢測時，使樣本恢復至室溫。
    [試劑]
    1．預包被微孔板
    2．陽性對照
    3．弱陽性對照
    4。陰性對照
    5．標本稀釋液
    6，濃縮酶聯(lián)物
    7，底物A、B
    8．終止液
    [儀器]  酶標儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀。
    [檢測步驟]
    1．配制洗滌液  l瓶濃縮洗滌液加475ml蒸餾水。配好的洗滌液短期內可置室溫環(huán)境中，長期可存于2—8℃環(huán)境中。
    2．配制酶聯(lián)物  按1：101倍稀釋，即取1u1濃縮酶聯(lián)物加酶聯(lián)物稀釋液1 000ul(根據檢測標本數量確定稀釋量)，未用完的丟棄。
    3．待試劑盒平衡至室溫后，待測標本按1；51稀釋，即取4tA血清與200u1標本稀釋液混合。
    4．將稀釋標本置37℃環(huán)境中20min。
    5。各加100ul陽性、弱陽性、陰性對照及已稀釋待測標本上清液于相應孔中，空白對照孔加100u1標本稀釋液，蓋好反應板，置37℃環(huán)境中30min。
    6。甩盡板中液體，每孔用200～300ul洗滌液洗5次，每次均需拍干。
    7．每孔加酶聯(lián)物100~1，蓋好反應板，置37℃環(huán)境中30min。
    8．甩盡板中液體，洗5次，每次拍干。
    9．加底物A、B各1滴或各50tzl，混勻，置37℃環(huán)境中15min。
    10．取出，加終止液1滴，用酶標儀450nm測其OD值。若肉眼觀察則不加終止液，直接判斷結果。
    [結果判斷)
    1．陰性對照平均OD值須小于0．20。
    2．弱陽性對照平均OD值須在0．20—0．65。
    3．弱陽性對照與陰性對照的平均OD值之比須≥2。符合以上3個條件時，本試驗結果可信，否則重復實驗。
    4．若待測標本孔顯色比弱陽性對照孔深則判為陽性，反之為陰性。但在弱陽性對照值上下10％范圍內再測1次，如確實高于弱陽性對照則可判為陽性。
    [正常參考值]  肺炎衣原體抗體陰性
    [注意事項]   
    1．本實驗結果須結合臨床表現、病史作出診斷后，方可采取適當臨床處理。
    2。試劑盒雖然含有消除干擾因子的物質，但仍可能有少量標本難以除盡干擾。因此，如某標本多項IgM均為陽性，應考慮RF的干擾。