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博湖試劑-純化抗體的定性和定量
點(diǎn)擊次數(shù):592 更新時(shí)間:2014-06-05

純化抗體的定性和定量
 
    在純化抗體時(shí)需要控制好幾個(gè)指標(biāo),包括純度,含量及抗體的抗原結(jié)合活性。
 
    純度  在實(shí)驗(yàn)的任何階段,確定抗體溶液純度的zui簡(jiǎn)單方法是取一部分樣本進(jìn)行SDS-PAGE電泳。凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色(靈敏度為0.1—0.5ug/帶)或銀染(靈敏度1~l0ug/帶)。
 
    定量  如果抗體還不純,有一個(gè)快捷的定量方法,即通過(guò)SDS-PAGE電泳分離出輕、重鏈,然后和已知的標(biāo)準(zhǔn)染色帶比較。如果需要分析許多樣本,用免疫測(cè)定法對(duì)抗體定量較容易。如果抗體是經(jīng)過(guò)純化的,可通過(guò)測(cè)蛋白總量代替上述兩種方法,包括附錄Ⅱ所述的方法。有一簡(jiǎn)單的方法,即紫外吸收法??贵w的量可通過(guò)測(cè)280nm處的吸收值來(lái)測(cè)(10D大致相當(dāng)于0.75mg/m1的純化抗體)。
 
    抗原結(jié)合活性  一般說(shuō)來(lái),用本書(shū)建議使用的純化方法不會(huì)引起抗原結(jié)合活性的改變。用蛋白G或蛋白A樹(shù)脂很少導(dǎo)致抗體活性喪失。然而,如果終抗體產(chǎn)物的作用不如原來(lái)所預(yù)料的好,檢測(cè)抗體純化過(guò)程所丟失的活性就極為重要。用一系列滴定法比較純化的抗體和其原材料的活性,以標(biāo)定每一步中的總抗體量,這將有助于較好的估計(jì)通過(guò)純化所丟失的活性。

 Anti-CA125 (Ovarian cancer antigen)  卵巢癌抗原抗體 
 Anti-CA15-3  乳腺癌相關(guān)抗原抗體
 Anti-CAD/CPAN(Caspase-Activated Deoxyribonuclease)  Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶抗體
 Anti-Casein(bovine)  抗牛酪蛋白抗體
 Anti-Calcineurin α /PP-2B alpha 1  蛋白磷酸酯酶-2B催化亞單位抗體
 Anti-caldesmon  鈣介質(zhì)素抗體
 Anti-Calpain 1  鈣蛋白酶抗體
 Anti-Calpain 2 (Calcium activated neutral proteinase 2)  鈣激活的中性蛋白酶2抗體
 Anti-CNN1(Calponin 1)  鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體
 Anti-CaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha)  鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)蛋白激酶2α抗體
 Anti-phospho-CaMK2a(pThr286)  磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)蛋白激酶2α抗體
 Anti-Camk1g(Calcium/calmodulin dependent protein kinase IG)  鈣/鈣調(diào)蛋白依賴(lài)蛋白激酶IG抗體 
 Anti-CaMK2b(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II beita)  鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)蛋白激酶2b抗體

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