培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 本公司代理ATCC細胞,提供售前售后一條龍服務(wù),若要獲取詳細的說明書或價格信息,請咨詢在線客服。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | SK-MES-1(人肺鱗癌細胞)說明書 | SK-MES-1 (human lung squamous cell carcinoma) | 5×106cells |
產(chǎn)品特點: 1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。 2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。 4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。 5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。 6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。 7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。 ? 細胞培養(yǎng)技巧: 一、凍存時的注意事項: 1. 在冷凍保存之前,應觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 % 2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質(zhì),例如是否有雜細胞或者支原體等。 3. 使用的DMSO 應為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應為試劑級等級,以高壓蒸汽 滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。 4. 冷凍保存的細胞濃度: 4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。 4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應作一個backup culture,以防止冷凍失敗。 凍存的步驟: 1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細胞生長情形。 2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。 3. 依細胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1 ml) 計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。 4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻, 分裝于已標示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。 5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。 6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設(shè)定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。 實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 酰胺 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR Formamide 大鼠胰島細胞*培養(yǎng)基100mL 貓爪草 訂購|咨詢 規(guī)格: 1g 豚鼠鉤端螺旋體IgG(Leptospira)ELISA試劑盒,英文名:Leptospira ELISA Kit 貝母素 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 大鼠Ⅸ型膠原α1(COL9α1)ELISA試劑盒,英文名:COL9α1 ELISA Kit 歐當歸內(nèi)酯A;Levistilide A 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 豚鼠白介素2(IL2)ELISA試劑盒,英文名:IL2 ELISA Kit 頭孢哌鈉 質(zhì)量規(guī)格:870μg-1015μg /mg,USP,BR Cefoperazone sodium U-118 MG(人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤)5×106cells/瓶×2 人參皂苷Rh2 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 人線粒體25-羧基維生素D-1α羥化酶(CYP27B1)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL小鼠黑色素瘤(Melanoma)ELISA試劑盒,英文名:Melanoma ELISA Kit 伏格列波糖 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR Voglibose 大鼠小鼠雜合神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞英文名稱:NG108-15 丹參B鎂 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg/vial α2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1 FFA ELISA Kit 游離脂肪(FFA)ELISA試劑盒 7-羥基-4-基香;4-Methy 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg G蛋白偶聯(lián)受體172B抗體 PRB1 ELISA Kit 堿性唾液脯氨豐富蛋白1(PRB1)ELISA試劑盒 干姜對照藥材 訂購|咨詢 規(guī)格: 1g ELISA Kit for Human Proheparin-binding EGF-like growth factor小鼠防御素α5(DEFα5)ELISA試劑盒,英文名:DEFα5 ELISA Kit 奧沙利鉑 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,細胞培養(yǎng)級 Oxaliplatin 角蛋白19(KRT19)重組蛋白英文名稱:Recombinant Keratin 19 (KRT19) 雌酚 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 人水通道蛋白4(AQP-4)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠前列腺特異性抗原(PSA)ELISA試劑盒,英文名:PSA ELISA Kit 酚-7-O-葡萄糖苷 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg 人促狀腺激素受體(Thyrotropin receptor)ELISA試劑盒人96T31.2-2000 pg/mL大鼠激肽釋放酶4(KLK4)ELISA試劑盒,英文名:KLK4 ELISA Kit SK-MES-1(人肺鱗癌細胞)說明書維生素K3 CAS 58-27-5 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 大豆皂苷BB CAS 51330-27-9 規(guī)格: 10mg 訂購|咨詢 骨化三醇 CAS 32222-06-3 規(guī)格: 10mg 訂購|咨詢 α-亞酸 CAS 463-40-1 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 雪松醇 CAS 77-53-2 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 吳茱萸次堿 CAS 84-26-4 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 三七皂苷Ft1 CAS 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 圣草酚 CAS 552-58-9 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 芹菜苷 CAS 26544-34-3 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 牛磺鵝去氧膽酸 CAS 516-35-8 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 氧化槐定堿 CAS 54809-74-4 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 櫟櫻酸 CAS 6812-81-3 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 異蓮心堿 CAS 6817-41-0 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 異葒草素 CAS 4261-42-1 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 |