培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。 本公司代理ATCC細(xì)胞,提供售前售后一條龍服務(wù),若要獲取詳細(xì)的說明書或價格信息,請咨詢在線客服。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | PIEC(豬髖動脈內(nèi)皮細(xì)胞 ) | PIEC (porcine iliac artery endothelial cells) | 5×106cells |
產(chǎn)品特點: 1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。 2、 可以處理各種細(xì)菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。 4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。 5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。 6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。 7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。 ? 細(xì)胞培養(yǎng)技巧: 一、凍存時的注意事項: 1. 在冷凍保存之前,應(yīng)觀察細(xì)胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細(xì)胞密度為80 – 90 % 2. 冷凍前檢測細(xì)胞是否保有其*性質(zhì),例如是否有雜細(xì)胞或者支原體等。 3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應(yīng)為試劑級等級,以高壓蒸汽 滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,因長期儲存后對細(xì)胞會有毒性。 4. 冷凍保存的細(xì)胞濃度: 4-1. 正常的成纖維細(xì)胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 雜交瘤細(xì)胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細(xì)胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。 4-3.貼壁腫瘤細(xì)胞: 1 x 10^6,依細(xì)胞種類而異。腺癌類的細(xì)胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 懸浮細(xì)胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細(xì)胞須至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細(xì)胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應(yīng)作一個backup culture,以防止冷凍失敗。 凍存的步驟: 1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細(xì)胞生長情形。 2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。 3. 依細(xì)胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1 ml) 計數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。 4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細(xì)胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻, 分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測。 5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。 6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設(shè)定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。 實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 人白介素18結(jié)合蛋白(IL18BP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human IL18BP (Interleukin 18 Binding Protein) ELISA Kit 人I類主要組織相容性復(fù)合體G(MHCG)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human MHCG (Major Histocompatibility Complex Class I G) ELISA Kit 人酪氨酸酶(TYR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human TYR (Tyrosinase) ELISA Kit 人纖維蛋白原相關(guān)蛋白1(FGL1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human FGL1 (Fibrinogen Like Protein 1) ELISA Kit 人核因子κB2(NFκB2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human NFκB2 (Nuclear Factor Kappa B2) ELISA Kit 人衰老關(guān)鍵蛋白2(FBLN2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human FBLN2 (Fibulin 2) ELISA Kit 人血小板衍生生長因子亞基A(PDGFA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human PDGFA (Platelet Derived Growth Factor Subunit A ) ELISA Kit 人血小板衍生生長因子亞基B(PDGFB)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human PDGFB (Platelet Derived Growth Factor Subunit B) ELISA Kit 人類粘蛋白2(ORM2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human ORM2 (Orosomucoid 2) ELISA Kit 人冷球蛋白(CG)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CG (Cryoglobulin) ELISA Kit 人衰老關(guān)鍵蛋白3(FBLN3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human FBLN3 (Fibulin 3) ELISA Kit 人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子抗體(GM-CSF Ab)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human GM-CSF Ab (Anti-Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor Antibody) ELISA Kit 人蛋白聚糖4(PRG4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human PRG4 (Proteoglycan 4) ELISA Kit 人粒細(xì)胞特異性抗核抗體(GSANA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human GSANA (Granulocyte Specific Anti-Nuclear Antibody) ELISA Kit PIEC(豬髖動脈內(nèi)皮細(xì)胞 )surface layer protein 酸細(xì)菌表面蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml CLRN3/TMEM12 跨膜蛋白12抗體 規(guī)格: 0.2ml Cullin/C10orf46 CULLIN抗體 規(guī)格: 0.2ml ACD 上皮質(zhì)發(fā)育異常蛋白抗體 0.2ml Goat Anti-human IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml ANGPTL6 管生成素相關(guān)蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2ml IFN-Alpha 2b/Interferon alpha 2/INFA2 干擾素α2b抗體 規(guī)格: 0.1ml 4 Hydroxynonenal 4羥基壬烯酸抗體 規(guī)格: 0.1ml Centaurin γ1 中心體肌動蛋白γ1抗體(增強型PI3K蛋白) 規(guī)格: 0.2ml CHMP1A 染色質(zhì)修飾蛋白1A抗體 規(guī)格: 0.2ml Rabbit Anti-Monkey IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗猴IgG 規(guī)格: 2ml ACE2 管緊張素轉(zhuǎn)換酶2抗體 0.1ml SH2D2A 管內(nèi)皮生因子受體相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml BOD1 雙向染色體細(xì)胞分裂蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml |