凍存的步驟: 1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細胞生長情形。 2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。 3. 依細胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1 ml) 計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。 4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻, 分裝于已標示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。 5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。 6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。 本公司代理ATCC細胞,提供售前售后一條龍服務,若要獲取詳細的說明書或價格信息,請咨詢在線客服。 產品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 大鼠肝實質細胞 | Parenchymal cells of rat liver | 5×105cells |
產品特點: 1、 使用方便:不需昂貴設備。 2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。 4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。 5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。 6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。 7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。 ? 細胞培養(yǎng)技巧: 一、凍存時的注意事項: 1. 在冷凍保存之前,應觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 % 2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質,例如是否有雜細胞或者支原體等。 3. 使用的DMSO 應為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應為試劑級等級,以高壓蒸汽 滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。 4. 冷凍保存的細胞濃度: 4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。 4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應作一個backup culture,以防止冷凍失敗。 培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 多明 訂購|咨詢 規(guī)格: 100mg 化鐵蛋白Fe65抗體 FN ELISA Kit 纖維連接蛋白(FN)ELISA試劑盒 核糖核(酵母) 質量規(guī)格:>90%,BR RNA 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae香菇 Lentinula edodes 歐夾竹桃苷 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%;5mg/支 FAM63A蛋白抗體 CHD3 ELISA Kit 染色質域解旋酶DNA結合蛋白3(CHD3)ELISA試劑盒 二十八(>98%,BR) 質量規(guī)格:>98%,BR 1-Octacosanol 白介素11(IL11)重組蛋白英文名稱:Recombinant Interleukin 11 (IL11) 維生素A 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥99%;20mg 人交叉的同族體4(ROBO4)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠CD80分子(CD80/B7-1)ELISA試劑盒,英文名:CD80/B7-1 ELISA Kit 鹽四環(huán)素溶液,50 mg/ml 質量規(guī)格:50 mg/ml,滅菌裝 Tetracycline hydrochloride solution, 50 mg/ml, sterile 血管內皮生長因子B(VEGFB)重組蛋白英文名稱:Recombinant Vascular Endothelial Growth Factor B (VEGFB) 硬脂(50%) 質量規(guī)格:含量50%,藥用級 Stearic acid 酒假絲酵母 Candida kefyrCT26.WT(小鼠結腸細胞) 蒲公英萜酯 英文名稱:Taraxerol acetate 保存:-20℃ 規(guī)格:HPLC≥98%10mg/支 鈉離子通道蛋白7α/Na+ CP type VIIα抗體 特定 訂購|咨詢 規(guī)格: 50mg ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 17小鼠白介素9(IL-9)ELISA試劑盒,英文名:IL-9 ELISA Kit 天青II曙紅 質量規(guī)格:BS Azure II eosinate 人呼吸道上皮細胞*培養(yǎng)基100mL 丹參素 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial ELISA Kit for Vitamin D3大鼠巢蛋白2(NID2)ELISA試劑盒,英文名:NID2 ELISA Kit 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 錨蛋白重復結構域蛋白22抗體 Lp-α ELISA Kit 脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒 桿菌肽鋅 標準品 訂購|咨詢 規(guī)格: 60mg 人血管生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠內臟脂肪特異性絲氨蛋白酶抑制劑(vaspin)ELISA試劑盒,英文名:vaspin ELISA Kit 大鼠肝實質細胞Rabbit Anti-Avidin/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗親和素 規(guī)格: 0.1mlMAdCAM1 粘膜細胞粘附分子1抗體 規(guī)格: 0.2ml PCK2 磷酸羧化酶2抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-MAP3K8/Tpl2 (Thr290) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶8抗體 規(guī)格: 0.1ml phospho-PRKD3(Ser41) 磷酸化蛋白激酶C nu型抗體 規(guī)格: 0.1mlEphA8/Eph receptor A8 酪氨酸蛋白激酶受體A8抗體 規(guī)格: 0.2ml VDAC3 線粒體外膜孔蛋白3抗體(電壓依賴陰離子通道蛋白3) 規(guī)格: 0.2mlDISC1 (CT) DISC1 C端抗體 規(guī)格: 0.2ml Phospho-Bcl-2(Thr129) 磷酸化Bcl-2抗體 規(guī)格: 0.1ml CRELD2 富含半胱氨酸與表皮生因子樣蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml C6orf58 6號染色體開放閱讀框58抗體 規(guī)格: 0.2ml STAT1 信號轉導與轉錄激活因子1抗體 規(guī)格: 0.1ml NeuroD1/NEUROD 神經細胞分化因子1抗體 規(guī)格: 0.1ml CHCHD6 卷曲螺旋結構域蛋白CHCHD6抗體 規(guī)格: 0.2ml KLF5/UKHC 驅動蛋白KIF5B抗體 規(guī)格: 0.1ml SDF4 基質細胞衍生因子4抗體(鈣結合蛋白) 規(guī)格: 0.2ml MID2/RNF60/Midline-2 環(huán)指蛋白60抗體 規(guī)格: 0.2ml Rabbit Anti-Guinea pig IgM 兔抗豚鼠IgM 規(guī)格: 1mg |