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COLO 320DM(人結直腸腺癌細胞)說明書
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產品特點:
COLO 320DM(人結直腸腺癌細胞)說明書在冷凍保存之前,應觀察細胞生長是否良好 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 %冷凍前檢測細胞是否保有其*性質,例如是否有雜細胞或者支原體等。
  COLO 320DM(人結直腸腺癌細胞)說明書的詳細資料:

凍存的步驟:
1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細胞生長情形。
2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。
3. 依細胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1 ml) 計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。
4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻,
分裝于已標示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。
5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。
6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。

本公司代理ATCC細胞,提供售前售后一條龍服務,若要獲取詳細的說明書或價格信息,請咨詢在線客服。

產品名稱

英文名稱

規(guī)格

COLO 320DM(人結直腸腺癌細胞)說明書

COLO 320DM (human colorectal adenocarcinoma cell)

5×106cells

產品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。
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細胞培養(yǎng)技巧:
一、凍存時的注意事項:
1. 在冷凍保存之前,應觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 %
2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質,例如是否有雜細胞或者支原體等。
3. 使用的DMSO 應為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應為試劑級等級,以高壓蒸汽
滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。
4. 冷凍保存的細胞濃度:
4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml
4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。
4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。
4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。
5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應作一個backup culture,以防止冷凍失敗。 
培養(yǎng)操作步驟
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時; 
4.將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

兔膠原酶II(Collagenase II)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔腦環(huán)指蛋白(BFP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔絲氨酸蛋白酶8(PRSS8)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔多巴胺β羥化酶(DβH)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  

兔腺苷酸環(huán)化酶相關蛋白1(CAP1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

Slit同源物2(Slit2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔二磷酸尿核苷葡糖醛酸基轉移酶2家族肽B4(UGT2B4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔抗糖蛋白抗體(GP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔鈣聯(lián)蛋白(CNX)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  

兔糖鏈抗原153(CA153)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔骨骼肌特異性受體酪氨酸激酶(MUSK)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2(BACE2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔喋呤(MTX)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔端粒酶(TE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

COLO 320DM(人結直腸腺癌細胞)說明書CK2  細胞角蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml

GLUT8  葡萄糖轉運蛋白8抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-Zyxin (Ser142/Ser143)  磷酸化斑聯(lián)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

PFK2/PFKFB3  6磷酸果糖激酶2抗體 規(guī)格: 0.2ml

GABARAPL1  γ氨基丁酸受體相關蛋白樣1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Histone H2B  組蛋白H2B抗體 規(guī)格: 0.1ml

HSD11B1/HSD1  羥基類固醇脫酶11β1抗體 規(guī)格: 0.1ml

DRD2  多巴胺受體D2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-NFKB p65(Ser276)  磷酸化細胞核因子NF-κB p65抗體 規(guī)格: 0.1ml

TNF-alpha(1F6)  瘤壞死因子-α單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml

ATP citrate lyase/ACLY  三磷酸檸檬酸裂解酶抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-NPM (Thr199)  磷酸化核仁磷酸蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-eIF4EBP1/2/3(Thr36)  磷酸化4E結合蛋白1,2,3抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-Rb(Ser249)  視網膜母細胞瘤相關蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-FoxO3a (Ser318/321)  磷酸化叉蛋白3A抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HSL (Ser863)  磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 規(guī)格: 0.1ml

RASL/RASL10A  Ras樣蛋白家族10A抗體 規(guī)格: 0.2mlAdenylosuccinate Lyase  苷酸琥珀酸裂解酶抗體 規(guī)格: 0.2ml

 

 

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