運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

培養(yǎng)：
1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺內(nèi)，固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個(gè)橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無菌培養(yǎng)皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。
4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進(jìn)行碾磨，同時(shí)不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。
5.將碾磨好的細(xì)胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。
6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計(jì)數(shù)。
7.將稀釋好的細(xì)胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。
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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) =計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線。

水飛薊寧 訂購|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 大鼠γ-分泌激活蛋白(γSAP)ELISA試劑盒，英文名：γSAP ELISA Kit

款冬；款冬素,款冬花素  英文名稱：Coltsfoot Tussilago farfara Flos farfarae ketone; Su, Su   保存：-20℃   規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支 腦質(zhì)膜單胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白PMAT抗體

L-賴氨鹽鹽 規(guī)格： HPLC≥98%;200mg 訂購|咨詢 ELISA Kit for Human Junction plakoglobin小鼠Ⅱ型膠原交聯(lián)羧基端肽(CTXⅡ)ELISA試劑盒，英文名：CTXⅡ ELISA Kit

鹽達(dá)泊西汀(右旋) 質(zhì)量規(guī)格：>99%,右旋 Dapoxetine hydrochloride 中國臺灣根霉 Rhizopus formosensis大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

絡(luò)塞琳 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 ELISA Kit for Human Type I iodothyronine deiodinase小鼠轉(zhuǎn)錄激活因子3(ATF3)ELISA試劑盒，英文名：ATF3 ELISA Kit

鹽噻氯匹定  英文名稱：Ticlopidine hydrochloride   保存：-20℃   規(guī)格：100mg RAS癌基因相關(guān)蛋白Rab6C抗體

蟾毒靈 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 人扭轉(zhuǎn)蛋白2A(TOR2A)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)ELISA試劑盒，英文名：ALT ELISA Kit

獐牙菜苦苷 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 ELISA Kit for Human Proteinase-activated receptor 1小鼠溶血脂受體3(LPAR3)ELISA試劑盒，英文名：LPAR3 ELISA Kit

香樹脂雙葡萄糖苷;Syringare 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢 5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基/5% Dextrose Broth Medium藥品細(xì)菌培養(yǎng)，滴眼劑金黃色葡萄球菌培養(yǎng)等250克國產(chǎn)/進(jìn)口

肌鈉  英文名稱：Creatine phosphate sodium   保存：-20℃   規(guī)格：100mg 修補(bǔ)相關(guān)蛋白PTCHD3抗體

芹菜素-7-O-β-D-喃葡萄糖苷 規(guī)格： HPLC≥98%;5mg 訂購|咨詢 人源性激肽釋放酶結(jié)合蛋白 ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠載脂蛋白B100(APOB100)ELISA試劑盒，英文名：APOB100 ELISA Kit

愛普列特  英文名稱：Epristeride   保存：-20℃   規(guī)格：100mg RPS27A抗體

去芹菜糖桔梗皂苷D;Deapio-pla 訂購|咨詢 規(guī)格： 10mg 5號染色體開放閱讀框34抗體 C4b ELISA Kit 補(bǔ)體片斷4b(C4b)ELISA試劑盒

大鼠肺血管平滑肌細(xì)胞Nadrin  神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育相關(guān)調(diào)控蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlDonkey Anti-rabbit IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的驢抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-HSL (Ser959+960)  磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 規(guī)格: 0.1mlTRAIL  瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體抗體 規(guī)格: 0.1ml

p47-phox  NADPH氧化酶活化蛋白p47抗體 規(guī)格: 0.2mlIL-23  白介素-23抗體 規(guī)格: 0.1ml

CSFV/Classical swine fever virus  豬瘟病毒抗體 0.2mlKLF6/PAC1  轉(zhuǎn)染抑基因KLF6抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-Met(Tyr1234/1235)  磷酸化肝細(xì)胞生因子受體(原基因)抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-SEK1/MKK4 (Ser257/Thr261)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-dog IgG/AP  堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗狗IgG 規(guī)格: 0.1mlET-3  內(nèi)皮素3抗體 規(guī)格: 0.2ml

SKA1  紡錘體和著絲粒相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlUACA  葡萄膜自身抗原Uaca抗體 規(guī)格: 0.2ml

MAP3K8/TPL2  絲裂原活化蛋白激酶激酶8抗體 規(guī)格: 0.2mlPRMT5  組蛋白氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶5抗體 規(guī)格: 0.2ml

RASSF6  RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

IRAK1  白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體 規(guī)格: 0.1mlRAB38  G蛋白結(jié)合蛋白RAB38抗體 規(guī)格: 0.2ml

ASBT/SLC10A2  頂膜鈉依賴性膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlSSB/La  干燥癥SSB/La抗體 規(guī)格: 0.2ml

CLASP2  細(xì)胞連接相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlMSH Alpha  促黑細(xì)胞激素α抗體 規(guī)格: 0.1ml

TrK A/NTRK1  酪氨酸激酶A抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-14-3-3 protein zeta/delta(Ser58)  磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗體 0.1ml

C10orf63/Enkurin  10號染色體開放閱讀框63抗體 規(guī)格: 0.2mlPXR  孤兒核受體PAR1抗體 規(guī)格: 0.2ml

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：
1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測樣品時(shí)均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計(jì)算時(shí)請后乘以稀釋倍數(shù)。