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硫氧還蛋白過氧化物酶測試盒100管/96樣
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硫氧還蛋白過氧化物酶測試盒100管/96樣公司正在出售的產品:1.56-100 ng/mL 痢疾桿菌(SH)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 1.56-100 U/L ELISA Kit for Human Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 28 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Hu
  硫氧還蛋白過氧化物酶測試盒100管/96樣的詳細資料:

特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

產品名稱

硫氧還蛋白過氧化物酶測試盒100管/96樣

規(guī)格

100管/96樣

檢測方法

微量法

貨號

BJ-01S9568

11.png 

 

 

商品介紹:

測定意義:

TPX屬于過氧化物酶家族,在體內主要通過還原過氧化氫和一些氫過氧化物來實現(xiàn)抗氧化作用,功能與GPX類似,也是氧化還原循環(huán)關鍵酶之一。TPX普遍存在于各種生物體內,酵母、植物、動物、原生動物、寄生蟲甚至細菌和古細菌體內都含有該酶,在進化上高度保守。TPX與細胞增殖、分化、細胞凋亡及腫瘤發(fā)生調控密切相關。TPX的主要功能包括細胞脫毒、抗氧化和調節(jié)由過氧化氫介導的信號轉導和免疫反應。

測定原理:

TPX催化H2O2氧化二硫蘇糖醇(DTT),H2O2的吸收波長為240nm,通過測定240nm波長處吸光度的下降速率,即可計算出TPX活性。

需自備的儀器和用品:

紫外-可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節(jié)移液器、3ml石英比色皿、雙蒸水

測定步驟:

1、 酶標儀預熱30min以上,調節(jié)波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。

3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內用完)。

5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。

操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。

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