產品參數: 中文名稱 | 英文名稱 | 產品規(guī)格 | 產品貨號 | HDAC抑制劑(CI-994) | CI-994 | 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg | BJ-01X7444 |
商品詳細介紹: CI-994(Tacedinaline)是組蛋白脫乙酰酶(HDAC)的抑制劑,抑制重組HDAC1,2and3的IC50值分別為0.9,0.9,1.2μM. 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :112522-64-2 別名:Acetyldinaline;Tacedinaline;PD 123654;Goe 5549 純度:99.08% 分子量:269.3 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明: 1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點: 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。 5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養(yǎng)。 6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。 Cortex cinnamomi肉桂LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周CCL1/TCA3/I-309 嗜酸粒細胞趨化蛋白CCL1抗體 規(guī)格: 0.1ml Caprine Arthritis-encephalitis Virus(CAEV)山羊關節(jié)炎-腦脊髓炎病毒LAMP試劑盒(同MVV) 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周FAM3A 胰衍生因子抗體 規(guī)格: 0.1ml Marek's Disease Virus(MDV)馬立克氏病病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 1-2周ZNF804A 鋅指蛋白804A抗體 規(guī)格: 0.2ml Erwinia cypripedii勺蘭歐文氏PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-ALK/CD246(Tyr1278/1282/1283) 磷酸化間變型激抗體 規(guī)格: 0.1ml Fructus piperis longi蓽茇PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周CREB-H/CREB3L3 環(huán)苷酸應答元件結合蛋白H抗體 規(guī)格: 0.2ml Rotavirus A輪狀病毒A群RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周TREML2/TLT2 髓系細胞觸發(fā)受體樣轉錄因子2抗體 規(guī)格: 0.2ml Borrelia anserina鵝疏螺旋體(鵝包柔螺旋體)探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ANKRD17 錨蛋白重復結構域蛋白17抗體 規(guī)格: 0.2ml Radix ephedrae麻黃根染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周B4GALT7/GlcNAc beta 半糖轉移7亞基β1,4抗體 規(guī)格: 0.2ml Shigella spp.志賀氏屬通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周UBE2D2 泛素蛋白連接D2抗體 規(guī)格: 0.2ml Babesia motasi莫氏巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周P14ARF 抑基因p14抗體 規(guī)格: 0.1ml HDAC抑制劑(CI-994)HDAC6抑制劑(HPOB) Eg5ATPase活性抑制劑(K858) HDAC抑制劑(NKL 22) BCRP抑制劑(YHO-13351 free base) VEGFR抑制劑(SCR-1481B1) Pim激酶抑制劑(TP-3654) HDAC抑制劑(HDAC-IN-3) BACE1inhibitor抑制劑(AZD3839 free base) PRMT3抑制劑(XY1) MDAMB435/5T4/MDAMB361DYT2/MDAMB468和Raji(5T4-)抑制劑(MMAF-OMe) DprE1抑制劑(DprE1-IN-2)
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