中文名稱：細胞凋亡DNA Ladder檢測試劑盒 英文名稱：Cell Apotosis DNA Ladder Detection Kit 產(chǎn)品規(guī)格：20T|50T|100T 產(chǎn)品貨號：BJ-01X6379 本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細胞凋亡檢測（不推薦用于檢測組織樣本）。細胞核染色質(zhì)DNA 斷裂是細胞凋亡的標(biāo)志特征。在細胞發(fā)生凋亡時，核酸內(nèi)切酶被激活，選擇性降解染色質(zhì)DNA，形成50-300 kb 的大片段，并進而在核小體連接處斷裂，形成180-200 bp 或其整倍數(shù)的DNA片段，這些DNA 片段可從細胞中提取出來，通過瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙啶染色呈現(xiàn)為梯狀條帶（DNALadder），并據(jù)此判斷細胞凋亡產(chǎn)生。我司細胞凋亡DNA Ladder 檢測試劑盒提供了一種簡便、快速地提取染色質(zhì)DNA 的方法，并增加對小片段DNA 的回收，從而增強了檢測的敏感性。 注意事項 1. DNA Ladder 出現(xiàn)在細胞凋亡晚期，觀察細胞形態(tài)已發(fā)生皺縮出芽，染色質(zhì)*凝聚，細胞核已固縮斷裂的凋亡晚期形態(tài)，建議該種形態(tài)的凋亡細胞比例在30%以上時進行DNA Ladder 檢測或先進行Tunel檢測. 2. DNA Ladder 出現(xiàn)在一個較短的時間段，在凋亡早期取樣，則無DNA 降解的條帶，而在凋亡末期取樣則產(chǎn)生與細胞壞死相似的DNA 彌散條芾。因此取樣時間需根椐不同種類的細胞和誘導(dǎo)劑而摸索確定。 3. 貼壁細胞好不用消化而用細胞刮收集。 4. 某些細胞不產(chǎn)生這種核小體間的DNA 斷裂，而是產(chǎn)生50-300kb 的大片段斷裂。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備： 1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細胞處理： 1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 駱駝源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Mycobacterium africanum非洲分枝桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Radix gentianae龍膽探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Sargassum海藻PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Helicobacter cinaedi同性戀螺桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Semen juglandis核桃仁染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Jerry Slough Virus(JSV) 探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Cronartium fusiforme松紡錘瘤銹病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Proteus vulgaris普通變形桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Fructus jujubae大棗染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Avian Herpesvirus 2(Gallid Herpesvirus-2、GaHV-2)禽皰疹病毒2型LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Avian Infectious Bronchitis Virus(AIBV)禽傳染性支氣管炎病毒通用RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 細胞凋亡DNA Ladder檢測試劑盒細胞基質(zhì)金屬蛋白（MMP）總活性比色法定量檢測試劑盒 20次 Bradford大量蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒 50次 細胞二脂酰甘油（DAG）含量連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法 20次 細胞培養(yǎng)污染性支原體M.hominis鑒定16S rDNA 20次 M肉湯 英文名稱：M Broth 產(chǎn)品規(guī)格：10ml*20支/包 細胞MUSK激活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 20次 植物V型氫ATP（H＋－ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒 20次 血液一氧化氮合成總活性動力比色法定量檢測試劑盒 20次 細胞脂質(zhì)氫過氧化物 （HYDROPEROXIDE；LOOH）活性 50次 組織脊髓過氧化（MPO）活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑盒 20次 TTC乳糖瓊脂 英文名稱：Lactose TTC agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) |
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