中文名稱：M2亞基抑制劑(Triapine)

英文名稱：Triapine

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X7849

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

鹽酸去氫駱駝蓬堿

英文名：   Harmine hydrochloride

英文別名：   (3，4-b)indole,7-methoxy-1-methyl-9h-pyrido(monohydrochloride

CAS登錄號(hào)：   343-27-1

分子式：   C13H13ClN2O

1-咖啡酰奎寧酸

英文別名：   1-[[3-(3,4-dihydroxyphenyl)-1-oxo-2-propen-1-yl]oxy]-3,4,5-trihydroxy-,(1a,3R,4a,5R)

CAS登錄號(hào)：   1241-87-8

分子式：   C16H18O9

分子量：   354.31

柴胡皂苷B

英文名：   Saikosaponin B

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子結(jié)構(gòu)：     

外觀：   白色粉末

丹參酮IIA-磺酸鈉

CAS登錄號(hào)：   69659-80-9

分子式：   C19H17O6S.Na

分子量：   396.39

分子結(jié)構(gòu)：     

王不留行黃酮苷

英文名：   Vaccarin

英文別名：   6-(2-O-alpha-L-Arabinopyranosyl-beta-D-glucopyranosyl)-2-[4-(beta-D-glucopyranosyloxy)phenyl]-5,7-dihydroxy-4H-1-benzopyran-4-one

CAS登錄號(hào)：   53452-16-7

分子式：   C32H38O19

絞股藍(lán)皂苷

英文名：   Stevenleaf

CAS登錄號(hào)：   94987-08-3

分子結(jié)構(gòu)：     

外觀：   淺黃色粉末

延胡索乙素

英文名：   Tetrahydropalmatine

英文別名：   (D,L)-TETRAHYDROPALMATINE HYDROCHLORIDE

CAS登錄號(hào)：   6024-85-7

分子式：   C21H26ClNO4

五味子醇乙

CAS登錄號(hào)：   58546-54-6

分子式：   C23H28O7

分子量：   416.47

分子結(jié)構(gòu)：     

續(xù)隨二萜醇

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子結(jié)構(gòu)：     

規(guī)格：   20 mg/支

純度：   ≥ 98%

(R型)人參皂苷Rh1

英文名：   20(R)Ginsenoside Rh1

英文別名：   3β,12β,20β-Trihydroxy-5α-dammar-24-en-6α-yl β-D-glucopyranoside

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C35H60O9

(R型)人參皂苷Rh2

英文名：   （R）Ginsenoside Rh2

英文別名：   (3beta,12beta)-12,20-dihydroxydammar-24-en-3-yl beta-d-glucopyranoside

CAS登錄號(hào)：   112246-15-8

分子式：   C36H62O8

M2亞基抑制劑(Triapine)高爾基體綠色熒光探針  200μg  GolgiGreen2 ug pCAMBIA2330 pCAMBIA2330 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

茜素紅染色試劑盒(ph8.3)  10ml  Mordant Red 3纖維二糖-（CC）瓊脂 Cellobiose-polymyxin E Agar 250g

溶酶體藍(lán)色熒光探針  200μL  LysoBlue10g  Indole  室溫保存

神經(jīng)元示蹤劑—核黃  10mg  Nuclear Yellow(Hoechst S769121)50T 鏈球菌B族PCR檢測試劑盒   低溫運(yùn)輸，-20℃保存

尼氏小體染色液  100ml  Nissl body Staining Solution5mL 黑色素細(xì)胞生長因子-不含TPA Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

剛果紅(β-淀粉樣蛋白染料)  10mg  250mL Beta-ME-EDTA Solution（beta-EDTA溶液）  Beta-ME-EDTA Solution  常溫保存

神經(jīng)元綠色熒光探針  10mg  NeuroGreen1.5mL miRNA尿素-PAGE上樣液,6× miRNAoN -20℃保存

高氯酸化物[神經(jīng)元紅色熒光探針][DiIC12(3)]  10mg  NeuroRed2 ug pGCsi/H1/Neo SHGFP pGCsi/H1/Neo SHGFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

羰化青DiI(神經(jīng)元示蹤劑)  10mg  抗生素檢定培養(yǎng)基8號(hào) Antibiotic Agar NO.8 250g

微絲綠色熒光探針  200μL  Actin-Tracker Green1瓶 Cyc-Tag(S49)細(xì)胞株 Cyc-Tag(S49) 低溫運(yùn)輸和保存

細(xì)胞骨架藍(lán)色熒光探針  200μL  CIN-1瓊脂平板（9cm） CIN-1 Agar 10個(gè)/包

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)