中文名稱：Wortmannin(PI3K抑制劑)

英文名稱：Wortmannin

產(chǎn)品規(guī)格：0.5mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X7031

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

Tomato Ringspot Virus(ToRSV)番茄環(huán)斑病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CDKN2B/p15 INK4b  細胞周期蛋白依賴性激抑制劑2B抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rhizoma smilacis glabrae土茯苓PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周APP695 (CT)  淀粉樣肽前體蛋白抗體（C端） 規(guī)格: 0.1ml

Porcine rotavirus group C豬輪狀病毒C群RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HSD3B7  滋養(yǎng)層細胞抗原3β7抗體 規(guī)格: 0.2ml

Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1M-C)人免疫缺陷病毒1型M群C型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ICAM-2/CD102  細胞間粘附分子-2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Radix changii明黨參染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Mouse Anti-rat IgG/RBITC  羅丹明標記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.3ml

E.coli大腸桿通用LAMP試劑盒(含致病性和非致病性) 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周NXPH2  神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Bovine Hepervirus 2 (BHV-2)牛皰疹病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的羊抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

Cortex fraxini秦皮染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Phospho-RASGRF1(Ser929)  磷酸化Ras特異性核苷酸釋放因子1 規(guī)格: 0.1ml

Rhizoma bolbostematis土貝母PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周FANCG  DNA損傷修復基因XRCC9抗體 規(guī)格: 0.1ml

Porcine rotavirus group B豬輪狀病毒B群RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Phospho-MSK1 (Ser360)  磷酸化有絲分裂原和應激活化型蛋白激1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Wortmannin(PI3K抑制劑)人膜聯(lián)蛋白Ⅶ(ANX-Ⅶ)免疫試劑盒進口、分裝

培養(yǎng)基（蛋白胨水） 英文名稱：Indole Medium 產(chǎn)品規(guī)格：10g

人巨噬細胞移動抑制因子(MIF)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

梭菌增菌培養(yǎng)基（2015藥典） 英文名稱：Clostridium enrichment Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人登革熱(DF)抗體(IgG)免疫試劑盒*直銷

乳糖發(fā)酵管 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：20支

人NET-1 免疫試劑盒進口、組裝

豬甘油醛-3-脫氫(GAPDH)免疫試劑盒進口、組裝

犬2,3-二甘油酸(2,3-DPG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

小鼠牛小腸堿性(CIAP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

雞前列腺素E2(PGE2)免疫試劑盒進口、組裝

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)