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抗體特異性的選擇
點(diǎn)擊次數(shù):19 更新時(shí)間:2025-03-03

特異性的選擇主要需要考慮四個(gè)方面:蛋白特異性、種屬特異性、實(shí)驗(yàn)方法特異性、標(biāo)記物的特異性。

1、蛋白特異性

針對需要檢測的蛋白查找抗體,幾個(gè)細(xì)節(jié)要區(qū)分:

a.重組蛋白如果不是全長表達(dá),則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。

b.內(nèi)源性蛋白最好能清楚其剪切與修飾的方式,特殊表型的蛋白需要進(jìn)行序列比對,并結(jié)合抗體免疫原序列,查看交叉反應(yīng)的情況。

c.磷酸化蛋白檢測需要確定具體位點(diǎn),不同位點(diǎn)的磷酸化意味著可能有不同的機(jī)制存在,不宜一概而論。


2、種屬特異性

同種蛋白不同物種,有著或大或小的差異。

a.目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設(shè)計(jì)多肽抗原的,根據(jù)蛋白的同源性的情況與其他種屬發(fā)生交叉反應(yīng)。需要參照說明書注明的可反應(yīng)種屬信息。

b.一些稀有種屬很難找到抗體,可以通過蛋白的序列比對,選擇同源序列免疫的抗體,不過一般這種情況生產(chǎn)商不會(huì)受理其關(guān)于質(zhì)量的申訴,如果可以申請到免費(fèi)的抗體樣品,則利于抗體選擇。


3、實(shí)驗(yàn)方法特異性

目前使用抗體的實(shí)驗(yàn)方法有很多,不同的使用方法過程中,因?yàn)閷Φ鞍讟悠返奶幚矸绞讲灰粯?,蛋白的含量有差異,對抗體的識別表位和效價(jià)要求都是不一樣的。


4、標(biāo)記物的特異性

一般基于實(shí)驗(yàn)操作的實(shí)驗(yàn)方法不會(huì)使用帶有標(biāo)記的一抗,比如 WB、IHC 等,都是通過二抗類的試劑標(biāo)記達(dá)到結(jié)果呈現(xiàn)的目的。但是基于儀器分析的一些實(shí)驗(yàn),可能就會(huì)使用到直接標(biāo)記的一抗,比如流式實(shí)驗(yàn)。那么需要了解到自己將要使用的儀器能檢測到的熒光范圍,針對不通的參數(shù)要求選擇對應(yīng)的標(biāo)記物。在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中,需要選配不同的熒光標(biāo)記物。

        抗體能特異性地識別相應(yīng)的抗原,并與之結(jié)合。這種結(jié)合在體外也能發(fā)生,這種特性就是許多免疫檢測方法的基礎(chǔ)。抗原與抗體相互作用是非共價(jià)的,可逆的,其特性符合許多化學(xué)反應(yīng)的基本原理。但因?yàn)榭贵w分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),以及抗原分子結(jié)構(gòu)的多樣性,使抗原抗體結(jié)合反應(yīng)表現(xiàn)出復(fù)雜性 。

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